Purification et caractérisation de la 6-PGD à partir du foie de caille

Dans cette étude, l'enzyme 6-phosphogluconate déshydrogénase (6PGD) a été purifiée à partir du foie de caille en utilisant les méthodes de précipitation au sulfate d'ammonium et de chromatographie d'affinité sur Sepharose 4B 2', 5'-ADP, avec des activités spécifiques de 14,6 EU/mg, un rendement de 89 % et 112 plis de purification. L'activité enzymatique a été mesurée par spectrophotométrie à 340 nm. La pureté de l'enzyme a été vérifiée par SDS-PAGE. Le poids moléculaire de l'enzyme purifiée par la méthode SDS-PAGE a été calculé comme étant de 44 KDa. La détermination des protéines a été effectuée par la méthode de Bradford. Pour l'enzyme, le pH optimal (8,0), le pH stable (8,0), la force ionique optimale (600 mM dans Tris-HCl) et la température optimale (60°C) ont été déterminés. En outre, les valeurs KM et Vmax pour le 6-phosphogluconate (6-PGA) et le NADP+ ont été calculées comme étant respectivement de 0,058 et 0,0015 mM ; 0,0078 et 0,057 EU/ml.